Intercentia factors in PCR reactiones

Per PCR reactionem, quidam interferentes factores sunt saepe offendit.
Debitum ad valde altus sensitivity PCR, contaminationem consideretur esse unum ex maxime momenti factores afficiens PCR praecessi et potest producendum falsum positivum eventus.
Aeque discrimine sunt variis fontibus, quae ducunt ad falsum, negative results. Si vel essentialia partibus PCR Mixturam vel amplificationem reactionem se inhibuit aut impedivit, diagnostic assay impediatur. Hoc potest ducere ad reducitur efficientiam et etiam falsum negative praecessi.
Insuper inhibitionis, damnum ex target nucleic acidum integritas potest fieri debitum ad shipping et / vel repono conditionibus prior ad specimen praeparatio. In particulari, altum temperaturis vel sufficiunt repono potest ducere ad dampnum de cellulis et nucleic acida. Cellula et TEXTUS solidamentum et paraffin embedding sunt bene notum causas DNA fragmenta et perseverans forsit (videatur figuras I et II). In his casibus, etiam optimal desolatio et purificatio non auxilium.

Figura I | Effectus immobilitatis in DNA integritas
Agarose gel electrophoresis ostendit quod qualis est DNA separatim a paraffin sectiones of autopsia variari aliquanto. DNA de diversis mediocris fragmentum longitudines fuit praesens in excerpta fretus in solidamentum modum. DNA conservetur nisi fixa in patria gelida exemplaria et buffered neutrum formalin. Usus fortiter acidic bouin fixative aut unbuffered, formic acid-continet formalin exitus in a significant damnum DNA. Reliqua fractione valde fragmen.
In sinistro longitudo fragmenta exprimitur Kilobase pairs (KBP)

Figura II | Damnum integritas nucleic acidum peltas
(A) A 3'-V 'gap in utroque firmina erit consequuntur per confractus in target DNA. Synthesis DNA et adhuc fieri in parva fragmentum. Autem, si a primario annealing site est absentis in DNA fragmentum, solum linearibus amplificatio. In casu maxime fragmenta ut se, sed cedit erit parva et infra deprehendatur campester.
(B) damnum basium, maxime debitum ad depurationem et thymidine Dimer formationem, ducit ad diminutionem in numerum H-vincula et decrementum in TM. Per elongatae calefactio tempus, primers et conflandum ab matrice DNA et non annea etiam in minus restrictius conditionibus.
(C) adjacent thymine bases formare a TT Demer.
Alius commune forsit, quod saepe occurs in M. Diagnostics est minus, quam-meliorem solvo of target nucleic acida comparari phenol-chloroform extractionem. In extrema casibus, hoc potest consociata cum falsis negativis. Multo tempore potest salvus ferventis lysis vel enzymatic digestio cell elit, sed hoc modo saepe praecessi in humilis PCR sensum propter insufficiens nucleic acidum release.

Inhibitionis polymerase operatio in amplificationem

In generali, inhibitionis adhibetur ut continens conceptum describere omnes factores qui ducunt ad suboptimal PCR praecessi. In stricte, inhibitionis, inhibitionis est limitata ad operationem in enzyme, id est, reduces vel impedit, subiectum-productum conversionem per commercium cum activae site de DNA Polymerase vel ejus cofactorem (eg, mg2 + pro taq dna polymerase).
Components in sample vel varii buffers et excerpta continet reagentia potest directe inhibere in enzyme vel captionem eius cofactors (eg edta), ita inactivating et rursus ducens ad minuatur vel falsum negative PCR praecessi.
Tamen, plures interactiones inter reactionem components et scopum, quibus nucleic acida sunt etiam designantur ut 'PCR inhibitors. Semel integritas cellula est distraxit ab Solante et nucleiic acidum est dimisit, interactiones inter sample et in circuitu solidum et solidum tempus fieri potest. Exempli gratia, 'scavengers' potest obligare unum aut geminus-subductis DNA per non-covalent interactiones et intercedere cum ulterius et purificationem reducendo numerum peltas quod eventually pervenire PCR reaction.
In generali, PCR inhibitors sunt praesens in maxime corpus fluidorum et reagentia propter orci Diagnostic probat (Urea in urina, Hemoglobin et Heparin in sanguine), in elit, CA2 + ions) et components in environment (Phenols, Metals)

Plus Proce PCR inhibitors potest inveniri in bacteria et Eukaryotic cellulis, non-target DNA, DNA-binding Macromolecule of TEXTUS Matrices et Laboratory apparatu ut caestus et plastics. Purificatio nucleiic acida durante vel post extractionem est maluit modum ad removere PCR inhibitors.
Hodie, variis automated extraction apparatu potest reponere multa manual protocols, sed C% convaluisset et / vel purificationem peltas quae nunquam fuisse effectum. Potential inhibitors potest etiam esse praesens in purificati nucleic acida vel ut iam effectus. Diversis strategies est ad redigendum impulsum inhibitors. Quod arbitrium est conveniens Polymererase potest habere significant impulsum inhibitor operatio. Alius probatur modi ad redigendum PCR inhibitionis sunt augendae polymerase concentration vel applicando additives ut BSA.
Inhibitionis PCR reactiones potest demonstrandum per usum internus processus qualitas imperium (IPC).
Cura debet capta est removere omnes reagentia et alia solutions in extractionem ornamentum, ut ethanol, EDTA, CETAB, LILL, Guscn, SDS, Isopropanol et a Nucleico gradum. Fretus in concentratione, ut movere vel inhibere PCR.